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體外診斷試劑C反應(yīng)蛋白實(shí)驗(yàn)室檢測技術(shù)
體外診斷試劑C反應(yīng)蛋白實(shí)驗(yàn)室檢測技術(shù)
加入時間：2011-12-06 10:44:26 當(dāng)前新聞點(diǎn)擊率：6524
普朗醫(yī)療器械公司資訊----臨床上最早測定體外診斷試劑--CPR（C反應(yīng)蛋白）的方法是基于凝集反應(yīng)的原理，將患者血清與肺炎雙球菌在試管中混合，通過目測的方式觀察是否有凝集現(xiàn)象出現(xiàn)來定性判斷。目前，檢測C反應(yīng)蛋白的實(shí)驗(yàn)室方法很多，不僅可以定性，亦可以定量。前面我們已經(jīng)為大家介紹了C反應(yīng)蛋白（體外診斷試劑）單擴(kuò)法和膠乳凝集法，今天接著為大家介紹C反應(yīng)蛋白的其他幾種實(shí)驗(yàn)室檢測技術(shù)：
一、體外診斷試劑--C反應(yīng)蛋白：速率散射比濁法
速率散射比濁法是Sternberg 1977 年創(chuàng)建的微量免疫沉淀法，是以測定溶液對光的散射程度來判斷樣品中抗原的含量。一定波長的光沿水平軸照射，碰到小顆粒的免疫復(fù)合物可導(dǎo)致光散射，散射強(qiáng)度與抗原抗體免疫復(fù)合物的含量成正比。
此法是一種抗原抗體結(jié)合反應(yīng)的動態(tài)測定法，可快速、準(zhǔn)確地測量樣品中抗原的含量，并且可在多種自動化檢測儀上測定結(jié)果。目前應(yīng)用較廣泛的自動化儀器是Backman - Coulter公司生產(chǎn)的全自動蛋白分析儀。速率散射比濁法在臨床上已作為CRP常規(guī)檢測手段。有研究顯示:速率散射比濁法在檢測時間、操作方法、結(jié)果精確度、重復(fù)性、靈敏度方面均優(yōu)于單擴(kuò)法。在靈敏度、準(zhǔn)確度上與膠乳凝集法相比也具有顯著性差異（P<0.05），明顯高于膠乳凝集法。
二、體外診斷試劑--C反應(yīng)蛋白：免疫透射比濁法
免疫透射比濁法是實(shí)驗(yàn)室常用檢測CRP的方法，目前許多廠家也都用此法，英科新創(chuàng)（廈門）科技有限公司的CRP就是該法。免疫透射比濁法也是一種微量的免疫沉淀測定法。其與速率散射比濁法不同的是以測定透過溶液的光量來反映待測抗原的含量。當(dāng)光線透過反應(yīng)體系時，溶液中的抗原抗體免疫復(fù)合物可對光線加以吸收和反射，使透射光減少。免疫復(fù)合物越多，吸收的光線越多，透射光越少，這種變化可用吸光度表示。若抗體量固定，所測吸光度與免疫復(fù)合物的量成正比，也與待測抗原的量成正比。以一系列已知濃度的抗原標(biāo)準(zhǔn)品作對照，即可以測出受檢物含量。袁斌等人曾利用全自動檢測儀對兩種定標(biāo)方法即二點(diǎn)定標(biāo)和多點(diǎn)定標(biāo)法測定CRP的結(jié)果進(jìn)行分析。研究表明，在回收率、重復(fù)性方面多點(diǎn)法優(yōu)于二點(diǎn)法。溶血、黃疸對CRP檢測的干擾不大，但多點(diǎn)法的干擾明顯低于二點(diǎn)法。作者認(rèn)為，原因主要是由于免疫比濁法其濁度與免疫復(fù)合物的濃度不能呈很好的線性關(guān)系。因此，不能按傳統(tǒng)的比色方法進(jìn)行測定，為確保結(jié)果可靠，建議用全自動檢測儀測定CRP時，應(yīng)采取多點(diǎn)定標(biāo)方式測定。
三、體外診斷試劑--C反應(yīng)蛋白：膠乳增強(qiáng)免疫透射比濁法
在上述的比濁法中，檢測CRP的敏感性方面仍不夠理想。這就需要建立更敏感、更精確、在血清CRP濃度較低的情況下仍具有較高準(zhǔn)確度的檢測CRP方法。于是人們對檢測方法進(jìn)行了改進(jìn)和更新，創(chuàng)立了膠乳增強(qiáng)免疫透射比濁法。
膠乳增強(qiáng)免疫透射比濁法基本原理是首先將抗體吸附在一種膠乳顆粒上，當(dāng)遇到相應(yīng)的抗原時，抗原抗體結(jié)合而出現(xiàn)膠乳凝集。單個膠乳顆粒的大小在入射光波長之內(nèi)，光線可透過。當(dāng)兩個以上膠乳顆粒凝集時，可阻礙光線透過，使透射光減少，其減少程度與膠乳凝集的程度成正比，亦與抗原量成正比。此方法是測定高敏C-反應(yīng)蛋白（Hs-CRP）一種新型的高敏檢測方法，具有快速、方便、準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)。胡敏等人采用膠乳增強(qiáng)免疫透射比濁法在全自動生化儀測定Hs-CRP方法學(xué)研究中顯示，該技術(shù)測定Hs-CRP分析范圍為0.125～12.5 mg/L ，最低檢測線0.115 mg/L ，批內(nèi)、批間精度分別為0.89%、0.90%。結(jié)果證明，膠乳增強(qiáng)免疫透射比濁法具有敏感性高、穩(wěn)定性好、方便快速的優(yōu)點(diǎn)，適宜于在臨床推廣使用。袁寶軍等人曾對免疫透射比濁法（ITD）和膠乳增強(qiáng)免疫透射比濁法（L-EITD）檢測CRP含量進(jìn)行了對比實(shí)驗(yàn)。結(jié)果表明，兩種方法檢測CRP線性、精密度、穩(wěn)定性較好且兩種方法有較好的相關(guān)性，但L EITD抗干擾的能力更強(qiáng)，這一結(jié)果與De BK等的報道一致。而且L-EITD法克服ITD法的缺點(diǎn)，無論抗原濃度過高或過低均能與相應(yīng)濃度的抗體結(jié)合，擴(kuò)大了檢測范圍。此外，L-EITD法檢測CRP在預(yù)測和預(yù)防冠心病、動脈粥樣硬化等心血管疾病中起重要作用。特別是CRP含量較時，L-EITD法更適合，更能對疾病做到早期預(yù)防、早期診斷和治療。
四、體外診斷試劑--C反應(yīng)蛋白：免疫標(biāo)記技術(shù)
免疫標(biāo)記技術(shù)用于CRP測定的免疫標(biāo)記方法有放射免疫法、酶免疫法、金標(biāo)免疫法等。由于放射免疫法存在放射性同位素半衰期短，放射性污染不易保存，穩(wěn)定性差等缺點(diǎn)，使用中有諸多不便，尤其是酶免疫法的廣泛應(yīng)用，使該方法現(xiàn)在臨床上已很少采用。目前，臨床應(yīng)用較多方法是以酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）為主的酶免疫標(biāo)記技術(shù)。該方法是將抗原抗體反應(yīng)的特異性與酶對底物高效催化作用結(jié)合起來，根據(jù)酶作用底物后顏色變化，通過酶標(biāo)儀對檢測樣品進(jìn)行定量測定和分析，并用標(biāo)準(zhǔn)曲線對照計算出CRP含量。ELISA法具有高度的敏感性、特異性，而且它的試劑比較穩(wěn)定，無放射性污染。尤其是商品試劑盒和自動化酶標(biāo)儀的應(yīng)用，使其成為適用于各級檢驗(yàn)部門的檢測手段。同時，也是測定患者血清Hs-CRP常用的方法之一。有研究報道，在血管粥樣硬化進(jìn)展期中，炎癥反應(yīng)起了重要作用，且屬于低度慢性炎癥狀態(tài)，Hs-CRP的檢測為低度慢性炎癥的發(fā)現(xiàn)提供了重要的研究手段。
文章來源---體外診斷試劑生產(chǎn)廠家普朗醫(yī)療器械公司網(wǎng)編發(fā)表！
