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醫(yī)療動(dòng)態(tài)
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全自動(dòng)生化分析儀常用的分析方法
全自動(dòng)生化分析儀常用的分析方法
加入時(shí)間：2020-05-28 10:35:52 當(dāng)前新聞點(diǎn)擊率：2635
全自動(dòng)生化分析儀是一種把生化分析中的取樣、加試劑、去干擾物、混合、恒溫反應(yīng)、自動(dòng)監(jiān)測(cè)、數(shù)據(jù)處理以及實(shí)驗(yàn)后清洗等步驟進(jìn)行自動(dòng)化操作的儀器，它完全模仿并代替了手工操作，目前已經(jīng)成為醫(yī)療機(jī)構(gòu)進(jìn)行臨床診斷所必可不少的儀器之一。
1.終點(diǎn)法 又稱為平衡法，是基于反應(yīng)達(dá)到平衡時(shí)反應(yīng)產(chǎn)物的吸收光譜特征及其對(duì)光吸收強(qiáng)度的大小對(duì)物質(zhì)進(jìn)行定量分析的一類方法，有一點(diǎn)終點(diǎn)法和兩點(diǎn)終點(diǎn)法兩類。 一點(diǎn)終點(diǎn)法的特點(diǎn)是使用一種或兩種試劑，當(dāng)待測(cè)物與試劑反應(yīng)達(dá)到終點(diǎn)時(shí)，測(cè)定混合溶液的吸光度來計(jì)算待測(cè)物的濃度，該法常用的有總蛋白雙縮脲法、白蛋白溴甲酚綠法、葡萄糖氧化酶法等，手工操作的大多數(shù)方法都是一點(diǎn)終點(diǎn)法。 兩點(diǎn)終點(diǎn)法也稱固定時(shí)間法，如果是單試劑分析，當(dāng)測(cè)定波長同干擾物質(zhì)的吸收光譜有重疊時(shí)，通過選用兩點(diǎn)終點(diǎn)法可消除樣品空白引起的干擾，其分析過程是在樣品與試劑混合后經(jīng)過一段延滯期讀取一個(gè)點(diǎn)A1，一定時(shí)間后再讀取A2，然后比較標(biāo)準(zhǔn)和測(cè)定的ΔA（ΔA=A2-A1）值，求得待測(cè)物的濃度。 為了提高終點(diǎn)法檢測(cè)的準(zhǔn)確性，選擇該法時(shí)應(yīng)設(shè)置終點(diǎn)法零點(diǎn)讀數(shù)、樣品空白等兩個(gè)分析參數(shù)，前者是在反應(yīng)前即開始讀數(shù)，可以扣除反應(yīng)前試劑和樣品混合液的空白讀數(shù)；后者是樣品加空白試劑所得到的吸光度，反應(yīng)需要占用一個(gè)比色杯。 2.連續(xù)監(jiān)測(cè)法 又稱動(dòng)態(tài)分析法、速率法等，基本原理是在酶促反應(yīng)的適合條件下，用物理、化學(xué)或酶促反應(yīng)的分析方法，在反應(yīng)速度恒定期（零級(jí)反應(yīng)期）內(nèi)連續(xù)觀察和記錄一定反應(yīng)時(shí)間內(nèi)底物或產(chǎn)物量的變化，以單位時(shí)間酶反應(yīng)初速度計(jì)算出酶活力的大小和代謝物的濃度。 具體方法有兩點(diǎn)速率法和多點(diǎn)速率法：兩點(diǎn)速率法是通過觀察在零級(jí)反應(yīng)期內(nèi)兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)的吸光度，用兩個(gè)點(diǎn)的吸光度的差值（ΔA）除以時(shí)間（分），計(jì)算出每分鐘的吸光度變化值；多點(diǎn)速率法是在零級(jí)反應(yīng)期內(nèi)每隔一定時(shí)間（2-30s)進(jìn)行一次監(jiān)測(cè)，連續(xù)監(jiān)測(cè)多次，求出單位時(shí)間內(nèi)的反應(yīng)速度，這種方法又可分為較小二乘法、多點(diǎn)δ法、回歸法、帶速率時(shí)間法等。該法具有明顯的優(yōu)點(diǎn)就是大大提高了分析速度和準(zhǔn)確性，主要適用于酶活性及其代謝產(chǎn)物的測(cè)定。 在連續(xù)監(jiān)測(cè)法過程中，即使不加樣品，試劑中的底物也會(huì)自動(dòng)降解得到一個(gè)結(jié)果，因此應(yīng)設(shè)置試劑空白速率，不同批號(hào)試劑的試劑空白速率不一樣，其值為以水代樣品測(cè)得的項(xiàng)目結(jié)果，樣品測(cè)定結(jié)果應(yīng)扣除試劑空白速率的數(shù)值。 3.比濁法 全自動(dòng)生化分析儀一般只能做透射免疫比濁分析，當(dāng)光線通過一定體積的含免疫復(fù)合物的溶液時(shí)，由于溶液中存在的抗原-抗體復(fù)合物粒子對(duì)光線的反射和吸收，引起透射光的減少，測(cè)定的光通量和抗原抗體復(fù)合物的量成反比。它常用于終點(diǎn)法測(cè)定，目前主要用于血清特種蛋白的檢測(cè)，如載脂蛋白、微量蛋白、急性時(shí)相反應(yīng)蛋白、免疫球蛋白以及某些藥物監(jiān)測(cè)等。 但是如果樣品中待測(cè)抗原濃度過高，抗原與抗體形成的免疫復(fù)合物分子將會(huì)變小，而且易發(fā)生解離，使?jié)岫确炊陆?，因此免疫比濁分析過程中必須設(shè)置前區(qū)檢查，比較分析過程中后兩個(gè)讀數(shù)點(diǎn)的差別，如果后一點(diǎn)比前一點(diǎn)的吸光度低，則表示抗原已過剩，應(yīng)將樣品稀釋后重測(cè)。 |
